3. ช่วงเวลาในการผสมพันธุ์ 

                        อาจเป็นวัน ฤดูกาล หรือช่วงเวลาของการผสมพันธุ์ ตัวอย่างเช่น แมลงหวี่ Drosophila pseudoobscura

มีช่วงเวลาเหมาะสมในการผสมพันธุ์ในตอนบ่าย แต่ Drosophila persimilis จะมีช่วงเวลาที่เหมาะสมในตอนเช้า ทำให้ไม่มีดอกาส

ในการผสมพันธุ์กันได้       

                    4. โครงสร้างของอวัยวะสืบพันธุ์

                        สิ่งมีชีวิตต่างสปีชีส์กันจะมีขนาดและรูปร่างของอวัยวะสืบพันธุ์แตกต่างกันทำให้ไม่สามารถผสมพันธุ์กันได้

เช่น โครงสร้างของดอกไม้บางชนิดมีลักษณะสอดคล้องกับลักษณะของแมลงหรือสัตว์บางชนิด ทำให้แมลงหรือสัตว์นั้นๆ

ถ่ายละอองเรณูเฉพาะพืชในสปีชีส์เดียวกันเท่านั้น

 

                        ภาพที่ 19-23 หนังสือเรียนสาระการเรียนรู้พื้นฐานและเพิ่มเติมชีววิทยาเล่ม 5 หน้า 144

                        โครงสร้างของดอกไม้ที่แตกต่างกัน

                        ก. กลีบดอกที่มีขนาดเหมาะสมกับชนิดของผึ้งตัวเล็ก

                        ข. กลีบดอกที่มีขนาดใหญ่ และเกสรตัวผู้ที่ยาวเหมาะสมกับชนิดของผึ้งตัวใหญ่

                    5. สรีรวิทยาของเซลล์สืบพันธุ์ 

                        เมื่อเซลล์สืบพันธุ์ของสิ่งมีชีวิตต่างสปีชีส์กันมีโอกาสมาพบกัน แต่ไม่สามารถปฎิสนธิกันได้ อาจเป็นเพราะอสุจิ

ไม่สามารถอยู่ภายในร่างกายเพศเมียได้ หรืออสุจิไม่สามารถสลายสารเคมีที่หุ้มเซลล์ไข่ของสิ่งมีชีวิตต่างสปีชีส์ได้